Opløsning af polypeptider
Hver aminosyre har iboende kemiske egenskaber, og et peptids opløselighed afhænger af dets sekvens og modifikationer. Vi anbefaler at tage en lille mængde af peptidet til opløselighedstest, før du opløser alle peptiderne.
Opløsning af peptider er et meget vigtigt skridt. Forkert solubilisering kan resultere i peptidtab eller eksperimentel fiasko. Opløseligheden af peptider afhænger hovedsageligt af peptidets sekvens, så vær opmærksom, når du designer peptidet. Det anbefales, at peptidsekvensen indeholder 20 % ladede rester for at øge dens opløselighed.
Før brug kan kunder følge følgende tre grundlæggende principper for at vælge et passende opløsningsmiddel til at opløse peptidet.
For det første skal det valgte opløsningsmiddel være i stand til fuldt ud at opløse peptidet; For det andet skal det valgte opløsningsmiddel være kompatibelt med de eksperimentelle betingelser; Endelig må det valgte opløsningsmiddel ikke reagere med eller nedbryde peptidet.
Så længe mængden af peptid tillader det, kan du først opløse en lille del af peptidet og derefter opløse hele prøven. Hvis du skal genvinde peptidet fra et opløsningsmiddel, kan du vælge et indledende opløsningsmiddel, der gør det nemt at fjerne efter frysetørring.
Følgende forslag kan hjælpe dig med at opløse peptider:
Peptider med mindre end 5 aminosyrer er generelt opløselige i vandige opløsninger og stærkt hydrofobe aminosyrer (W, I, L, F, M, V, Y) undtagen.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25 % ladede aminosyrer (E, D, K, R, H) af hydrofile peptider og indeholdende<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% Ladede aminosyrer kan også være uopløselige eller delvist opløselige i vand. Det er bedst først at opløse peptidet i en minimumsmængde af et stærkt organisk opløsningsmiddel såsom DMF, ACN, Isopropylalkohol, ethanol, eddikesyre, 4-8 M GdnHCl, urinstof eller DMSO (ikke i sekvens C, W, M ) og andre lignende organiske opløsningsmidler. Det er bedst langsomt at tilsætte det organiske opløsningsmiddel, der opløser peptidet, i den vandige opløsning dråbe for dråbe. Hvis opløsningen bliver grumset, kan den have nået opløselighedsgrænsen, og det nytter ikke at fortsætte med at opløse den. Det skal bemærkes, at det oprindeligt valgte opløsningsmiddel skal være kompatibelt med det eksperimentelle system.
Hydrophobic amino acid content >75% Stærkt hydrofobe peptider er generelt også uopløselige i vandige opløsninger. Sådanne peptider bør også først behandles med stærke organiske opløsningsmidler (f.eks. TFA, myresyre) opløses og kan også udfældes, hvis de tilsættes til en vandig opløsning. Den endelige peptidopløsning kan kræve høje koncentrationer af organiske opløsningsmidler for at denaturere den, og organiske opløsningsmidler bruges generelt ikke til biologiske funktionsundersøgelser i levende celler.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75 %) Polypeptidsekvenser har tendens til at danne overflødige intermolekylære hydrogenbindingsnetværk og danner let geler i koncentrerede vandige opløsninger. Sådanne peptider kan solubiliseres som beskrevet i trin 3. For at reducere mulige problemer under opløsning anbefales det, at kunder er mere opmærksomme på designet og sekvensen for at forbedre opløseligheden af peptidet.