To metoder til spaltning af peptider fra fastfaseharpikser.-

fast fase Fmoc Efter kemisk syntetisering af peptider er der mange metoder til spaltning. Nu vil vi introducere to grundlæggende typer, der almindeligvis bruges af alle.

Anbring den tørre harpiks i en rystekolbe, og tilsæt den passende mængde rensemiddel (Scavengers) Spaltningsreagens trifluoreddikesyre (TFA),10-25 ml/g Resin, dæk til og ryst med mellemrum ved stuetemperatur. Filtrer harpiksen med ny TFA Vask harpiksen 2-3 gange, kombiner filtratet, og tilsæt dråbevis 8-10 gange mængden af ​​isæter. Nogle gange kan en del af det dampes af TFA. Et råt peptidpræcipitat blev opnået. Diethylether kan afkøles med is for at forbedre udfældningseffektiviteten. Til sidst indsamles det udfældede rå peptid.

Anvendelig harpiks:king resin eller Rink Amide Resin

1 % TFA:

vil 1 g Polypeptidet-hængende harpiks blev tilsat til en opløsning indeholdende 1% TFA. Dichlormethanopløsningsglasrystekolben blev forseglet og rystet i 2 minutter. Brug nitrogen til at hælde filtratet i en anden ny methanol-rystekolbe indeholdende 10 % pyridin. Gentag ovenstående operation 10 gange. Brug 30 ml DCM, 30 ml MeOH Vask de resterende beskyttede peptider på harpiksen tre gange i rækkefølge. ved TLC eller HPLC Kontroller rengøringsresterne. Kombiner alt filtratet og afdamp opløsningsmidlet under reduceret tryk for at efterlade 5 % volumen. tilsæt 40 ​​ml vand, og is-afkølede blandingen for at hjælpe med udfældning. Efter filtrering vaskes produktet med rent vand tre gange og placeres i en vakuumtørreboks til brug. KOH eller P2O5 Lad tørre.

fortyndet eddikesyre:

brug AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Behandl peptiderne, der hænger på harpiksen, med skæreopløsning i 2 timer, filtrer harpiksen, og vask harpiksen tre gange med skæreopløsning. Tilsæt 15 gange volumenet af n-hexan til det blandede filtrat, og rotationsinddamp for at fjerne overskydende eddikesyre. Peptidgenvindingsmetoder er beskrevet detaljeret nedenfor.

Anvendelig harpiks:2- CTC Resin